Цветы одуванчика на спирту применение

Патологическая анатомия изучает нарушения нормального строения органов и тканей, возникающие в больном организме. При этом изучению подвергаются изменения, доступные невооруженному глазу, так и более тонкие, т.е. требующие применения микроскопа.

Задачей патолого–гистологической техники является подготовка патологического материала для микроскопического исследования, заключающаяся в обработке материала, позволяющей произвести оптическую дифференцировку элементов органов, ткани, клетки.

  • От каждого патологически измененного органа нужно брать несколько кусочков из различных участков поражения.
  • В вырезанном кусочке кроме измененного участка должна быть нормальная ткань.
  • Материал должен фиксироваться немедленно и непосредственно после взятия.
  • Сущность фиксации заключается в коллоидной реакции превращения тканевых белков из золя в гель, т.е. в коагуляции белков. Фиксирующая жидкость может быть простой или сложной. Сложными жидкостями называются жидкости, состоящие из нескольких веществ (жидкость Карнуа, Мюллера, Ценкера и др.).

    Недостатком метода является некоторое искажение истинной структуры органа. Искажение истинной структуры органа называется артефактом. Артефакт корригируется:

    1. Материал фиксируется непосредственно и немедленно после взятия.
    2. Для фиксации материала употребляется стеклянная или глиняная посуда (избегать металлической).
    3. Объем фиксирующей жидкости должен в 5–10 раз превышать объем фиксируемого материала.
    4. Фиксирующая жидкость меняется каждые сутки до тех пор, пока она не станет прозрачной.
    5. Материал оформляется этикеткой из плотной бумаги с надписью графитным карандашом или тушью.
    6. Фиксирование производится без доступа света.
    7. Повышенная температура ускоряет фиксацию. Оптимальная температура фиксации 370С.

    Самым распространенным стандартным методом фиксации является формалин. Формалином называется 40%-водный раствор газа формальдегида (НСОН).

    1. Формалин хранится в темном помещении или темной посуде при температуре не ниже 90С.
    2. Продажный формалин нейтрализуется прибавлением сухого мела или углекислой магнезии до 1/10–1/20 его объема.
    3. Рабочей фиксирующей жидкостью является 10–20% водный раствор формалина. Нейтрального формалина 10–20см3. Воды водопроводной 90–80см3.
    4. Показателем окончания фиксации в формалине является исчезновение кровавой окраски глубоких частей фиксируемого объекта.
    5. Метод экстренной фиксации:

    1. Невозможность выявления веществ, растворимых в воде (гликоген, мочевая кислота).
    2. Плохое выявление цитологических структур (хондриосом, аппарата Гольджи и др.).

    1. Жидкость Мюллера: Двухромовокислого калия–2,5гр.; Сернокислого натра–1,0гр.; Дистиллированной воды–100,0мл. Продолжительность фиксации–1–6 недель (при Т–370С, 1–2 недели с еженедельной сменой жидкости).
    2. Жидкость Ценкера: Жидкость Мюллера–100,0мл.; Сулемы–5,0гр. Уксусная кислота–5,0мл (добавляется перед употреблением). Продолжение фиксации 6–12часов.

    Примечание:

    1. После окончания фиксации–промывка в воде (24часа).
    2. Освобождение от сулемы в 70%-спирте.
    3. Зафиксированный материал хранится в 70%-спирте.

    Декальцинацией называется удаление извести из материала. Известь является физиологическим компонентом в некоторых тканях (кость) и очень часто является патологическим продуктом (в обызвествленных хрящах, в туберкулезных, сапных, паразитарных узелках). Известь создает препятствия для приготовления срезов и поэтому должны быть удалена. Все методы декальцинации основаны на растворении извести в слабых растворах кислот. Кислоты, в свою очередь, нейтрализуются слабыми щелочными растворами.

    1. Материал помещается в декальцинирующую жидкость, объем которой в 5–10 раз должен превышать объем взятого кусочка.
    2. Окончание декальцинации определяется возможностью произвести надрез или прокол иглой всего кусочка.
    3. Нейтрализация (24 часа) в одной из следующих жидкостей:

  • Кусочек помещают в бумажную ванночку, заливают растопленным парафином и быстро охлаждают в холодной воде. Блоки хранят в сухом виде.
  • Объектом патогистологического исследования является срез. Срезы могут быть изготовлены толщиной 1–2мк. Наиболее употребительными являются срезы толщиной в 6–12мк. Аппараты, на которых изготовляют срезы, называются микротомами.

    Цель окраски срезов является оптическая дифференцировка структурных элементов и тканей. Сущность окраски выявлена недостаточно. Для объяснения окраски предложено много теорий, которые могут быть подразделены на 3 группы:

    Примером химической теории является теория самообразования Эрлиха и Уина, согласно которой при окраске происходит химическое соединение краски и объекта по типу соединения кислот и щелочей с образованием соли.

    Примером физической теории окраски является теория адсорбции Ауэрбаха, согласно которой при окраске краситель откладывается на объекте по физическим законам адсорбции без химического соединения.

    Примером физико–химической теории является теория обменной адсорбции Михаэльса, согласно которой при окраске происходит коллоидная реакция адсорбции с последующим соединением краски и окрашиваемого вещества по типу адсорбирования. Эта теория в настоящее время является наиболее распространенной.

    1. Кислые (фоновые) протоплазматические краски. Например, эозин, фуксин кислый, пикриновая кислота.
    2. Основные (ядерные). Например, гематоксилин.
    3. Нейтральные. Например, метилен–блау, нейтраль–рот.
    4. Специальные. Например, Судан-III.

    1. Гематоксилин – эозин – обязательная ориентировочная окраска.
    2. Дополнительные методы окраски. Например, на соединительную. ткань, жир, гемосидерин, эластику и т.д.

    1. Гематоксилин–5–10мин.
    2. Вода водопроводная–до отхождения облачка краски.
    3. Эозин водный–0,5–1мин.
    4. Вода водопроводная–до отхождения облачка краски.
    5. Спирт 50%–1–2мин.
    6. Спирт 70%–1–2мин.
    7. Спирт 96%–1–2мин.
    8. Спирт абсолютный –1–2мин.
    9. Карбол–ксилол–до опускания срезов на дно.
    10. Ксилол–1–2мин.
    11. Натягивание срезов на предметное стекло.
    12. Покрыть покровным стеклом, предварительно заключив в бальзам.
    13. Просмотр препарата под микроскопом.

    Ядра клеток синие, с включением хроматинового вещества (темно–синие точки). Цитоплазма розового цвета. Соединительная ткань ярко–розового цвета.

    По материалам: www.kgau.ru